Trabalho de Conclusão de Curso
Documento
Autoria
Unidade da USP
Data de Apresentação
Orientador
Banca
Ramos, Ester Silveira (Presidente)
Bitondi, Marcia Maria Gentile
Simoes, Zila Luz Paulino
Título em Português
Verificação do padrão de metilação da região MHM de galinhas, por meio do ensaio MHM, utilizando PCR em tempo real
Palavras-chave em Português
Aves
Região MHM
PCR em tempo real
Metilação
Sexagem
Resumo em Português
As aves apresentam um sistema de cromossomos sexuais ZW, sendo que as fêmeas são as representantes do sexo heterogamético (ZW) e os machos, do homogamético (ZZ). Embora se saiba bastante a respeito dos cromossomos sexuais de Gallus gallus domesticus e outras aves, o processo que determina o sexo nesses animais ainda continua em estudo. No sistema XY de mamíferos, um cromossomo X é inativado nas fêmeas (XX), assegurando a expressão equivalente de genes X-específicos nos dois sexos. Esse processo, conhecido como compensação de dose, aparentemente não ocorre nas aves e, se ocorrer, possui características peculiares, não envolvendo a inativação de um cromossomo sexual inteiro e sim porções específicas do cromossomo Z. A região Male HyperMethylated, ou região MHM está presente nos machos ao longo do braço curto do cromossomo Z de G. domesticus. Esta é uma região diferencialmente metilada, composta por cópias em tandem, codificadora de um ncRNA, e mapeada próxima ao locus do gene Doublesexand Mab-3 RelatedFactor 1 (DMRT1), importante para o desenvolvimento testicular em várias espécies. Em embriões machos, a MHM está hipermetilada e não é transcrita. No entanto, ela se encontra hipometilada no Z nas fêmeas. O objetivo deste estudo foi a utilização da PCR em tempo real (semiquantitativa) em substituição à PCR tradicional (qualitativa) no ensaio MHM, e a quantificação da metilação em tecidos de diferentes origens embrionárias (rins, gônadas e cérebro) em quatro animais adultos. Por meio do ensaio MHM modificado, foi possível sexar os animais e verificar que todos os tecidos provenientes dos machos se apresentaram hipermetilados, enquanto nas fêmeas, os tecidos estavam hipometilados. De acordo com as análises foi verificado que não existe associação entre a quantificação da metilação da região MHM com a origem embrionária do tecido estudado. A modificação no ensaio MHM mostrou-se eficaz e poderá ser utilizada em estudos de quantificação da metilação do DNA em larga escala. Espera-se uma contribuição para análises posteriores em aves para determinação sexual e compensação de dose
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Data de Publicação
2016-04-13
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