Cultivo e obtenção de VLP de vírus chikunguny

O vírus Chikungunya (CHIKV, Togaviridae, Alphavirus) se espalhou pelos trópicos e causou surtos em vários países da África, Ásia, Europa e América. A transmissão para humanos é promovida por mosquitos do gênero Aedes ssp, particularmente Ae. aegypti e Ae. albopictus, duas espécies abundantes em nosso país. A patogênese causada na infecção pelo CHIKV manifesta-se primeiro como um estágio agudo de inflamação articular grave e doença febril, a qual pode evoluir para um estágio crônico de artrite. Diante deste cenário, percebe-se a necessidade da realização de estudos sobre estratégias de controle e prevenção da infecção pelo CHIKV, uma vez que não existem vacinas ou terapia antiviral específica contra este arbovírus. A principal abordagem deste trabalho compreende a expressão das proteínas imunogênicas do CHIKV e sua apresentação como partículas semelhantes a vírus (VLP) usando o sistema de células S2 de Drosophila melanogaster. Uma população de células S2 recombinantes (S2CHIKV-Hy) foi estabelecida anteriormente, demonstrando habilidade de expressar as proteínas de CHIKV na forma de VLP. Este trabalho se concentrou na avaliação de parâmetros cinéticos das células S2 adaptadas a diferentes meios de cultura e na análise da produção das proteínas de CHIKV. As células foram adaptadas aos meios de cultura IPL-41 modificado ou Schneider, pelo aumento semanal de uma fração de 10 % do meio de cultura final, sendo adicionada ao meio de cultura SF900III, no qual as células estavam crescendo originalmente. Após finalizada a adaptação, 2x106 células/mL S2CHIKV-Hy foram inoculadas em 20 mL de SF900 III, IPL-41 ou Schneider e crescidas a 28°C. A cinética de crescimento celular foi monitorada diariamente pela análise do crescimento e expressão das proteínas de Chikungunya nas células e sobrenadantes. A expressão das proteínas do CHIKV foi analisada por Western blot, imunofluorescência e citometria de fluxo. Inicialmente as cinéticas de crescimento revelaram que as células cresceram de maneira similar nos meios utilizados para adaptação e no meio original, embora com maior quantidade de células final neste último. A maior quantidade de proteína expressa foi encontrada em diferentes partes da cinética de crescimento, dependendo do meio utilizado. Embora as quantidades de proteínas expressas não tenham sido avaliadas quantitativamente, uma comparação relativa mostrou que as células cultivadas em IPL-41 e Schneider foram capazes de expressar mais proteínas de CHIKV por célula que em SF900III

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Data de Publicação

2019-08-21

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